1 范圍

      本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游苗測試條件、測試方法。

      本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū),無菌室或局部空氣凈化區(qū)域（包括沽凈工作臺）的浮游弟的測試和環(huán)境的驗證。

2 規(guī)范性引用文件

      下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。

      GB/T 16292—2010

      JGJ 71-1990 潔凈室施工及驗收規(guī)范

3 術語和定義

      下列術語和定義適用于本標準.

3.1

      菌落 colony forming units

      微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU。通用用個數表示。

3.2

      浮游曲 airborne microbe

      用本標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。

3.3

      浮流菌濃度 airborne microbe concentration

      單位體枳空氣中含浮游菌菌落數的多少，以計數濃度表示，單位是個/m，或個/L。

3.4

      糾偏限度 action levels

      對于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設定微生物含量等級。當檢測結果超過該等級時，應啟動監(jiān)測程序對該區(qū)域的微生物污染情況立即進行跟蹤。

3.5

      警戒限度 alert levels

      對于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設定一個微生物含量等級，從而給定了一個與正常狀態(tài)相比最早警戒的偏差值。當超過該最早警戒的偏差值時，應啟動保證工藝或環(huán)境不受影響的程序及相關措施.

4 測試方法

4.1 方法提要

      本標準采用的方法是計數濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇 能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數， 以判定該潔凈室的微生物濃度。

4.2 人員的職責及培訓

      潔凈室（區(qū)）的測試人員應進行本專業(yè)的培訓并獲得相應資格后才能履行對潔凈室（區(qū)）測試的職責，其中包含涉及的衛(wèi)生知識和基本微生物知識。

      潔凈室（區(qū)）的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿豉方式，外面的衣服不能帶進100 000級以上的區(qū)域。

4.3 儀器、輔助設備和培養(yǎng)基

      選擇合適的浮游闕采樣器，包括采用無油的抽氣泵,較低的氣流流速和較大的采樣藻最，以保證培養(yǎng)基表面的水分不被吹干。

      本測試需要具備儀器、輔助設備和培養(yǎng)基如下：

      a）浮游菌采樣器；

      b）培養(yǎng)皿；

      c) 培養(yǎng)基（見本標準附錄B）；

      d）恒溫培養(yǎng)箱；

      e）高壓蒸汽滅菌器；

4.4 浮游菌采樣器原理

      浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式果樣器,狹緩式采樣器由內部風機將氣流吸入，通過采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經培養(yǎng)后形成菌落，離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從采樣 器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培 養(yǎng)條上，附著的活微生物粒子經培養(yǎng)后形成菌落，針孔式采樣器是氣流通過一個金屬荔吸入，蓋子上是 密集的經過機械加工的特制小孔，通過風機將收集到的細小的空氣流直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經培養(yǎng)后形成菌落。

4.5 測試要點

4.5.1 必須按照測試儀器的檢定周期,定期對儀器作檢定.使用校驗合格，且在使用有效期內的儀器。

4.5.2 測試儀器在未進入被測區(qū)域時，若必需,則先清潔表面，或在相應的潔凈室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。

4.5.3 在100級潔凈室內用紙時，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔凈室內不能用鉛筆和橡皮。

4.5.4 使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。

4.5.4.1 儀器開機，預熱至穩(wěn)定后，方可按儀器說明書的規(guī)定對儀器進行校正，同時檢行采樣流量，并根據采樣量設定采樣時間。

4.5.4.2 采樣口必須用便于消毒及化學性能稔定的材料制造。

4.5.4.3 采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。

4.5.4.4 采樣管的長度應根據瀏點的高度定，盡量減少彎曲。

4.6 培養(yǎng)皿

4.6.1一般采用Φ90 mm×15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿.可根據所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

4.6.2 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。

4.7 培養(yǎng)基

      大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認可并經驗證了的培養(yǎng)基。其觀制方法見附錄B。

4.8 恒溫培賽箱

      必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。

4.9 測試步驟

4.9.1 測送前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。

4.9.1.1 采樣器進入被測房間前先用消毒嚴格房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜預先放在被測房間內。

4.9.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4.9.1.3 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及耳子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。

4.9.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.9.1.5 采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。

4.9.1.6 采樣儀器蛉消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā),時間不少于5 min，并檢查流母并根據采樣量調整設定采樣時間。

4.9.1.7 關閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。

4.9.1.8 置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。

4.10 培養(yǎng)

4.10.1 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.10.2 采用大豆酪蛋白瓊脂珞養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經采樣后，在30℃?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經采樣后，在20℃?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時間不少于5d。

4.10.3 每批培養(yǎng)基應有對照試驗,檢驗培養(yǎng)基本身是否污雜,可每批選定3只培養(yǎng)肌作對照培養(yǎng)。

4.11 菌落計數

4.11.1 用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計,然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.11.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

4.12 注意事項

4.12.1 使用前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質、破損或污染的不能使用。

4.12.2 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數作詳細的記錄。

4.12.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察,不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的曲落,并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時用顯微鏡鑒別。

5 測試規(guī)則

5.1 測試條件

      在測試之前，要對潔凈室（區(qū)）相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如:這種預先測試或可包括：

      a）溫度和相對濕度的測試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18℃?26℃,相對濕度在45%?65%為宜），同時應滿足測試儀器的使用范圍;

      b）室內送風員或風速的瀏試，或壓差的測試；

      c）高效過濾器的泄漏測試。

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