1 范圍

      本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌測試條件、測試方法。

      本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或局部空氣凈化區(qū)域（包括潔凈工作臺）的沉降菌的測試和環(huán)境的驗證。

2 規(guī)范性引用文件

      下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成辦議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本，凡是不注目期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

      GB/T 16292-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法

3 術(shù)語和定義

      下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn).

3.1

      沉降菌 settling microbe

      用本標(biāo)準(zhǔn)提及的方法收集空氣中的活微生物粒子,通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。

3.2

      沉降菌菌落數(shù) settling microbe plate count

      規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以個/皿表示。

4 測試方法

4.1 方法提要

      本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù),并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

4.2 人員的職責(zé)及培訓(xùn)

      潔凈室（區(qū)）的測試人員應(yīng)進(jìn)行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)資格后才能履行對潔凈室（區(qū)）測試的職責(zé)，其中包含涉及的衛(wèi)生知識和基本微生物知識。

      潔凈室（區(qū)）的測試人員應(yīng)選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級別要求相適應(yīng)的穿戴方式，外面的衣服不能帶進(jìn)100 000級以上的區(qū)域。

4.3 儀器

      儀器應(yīng)包括：

      a）培養(yǎng)皿；

      b）培養(yǎng)基（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B）；

      c）恒溫培養(yǎng)箱；

      d）高壓蒸汽滅菌器。

4.3.1 培養(yǎng)皿

      一般采用放90 mm×15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿。

4.3.2 培養(yǎng)基

      大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或用戶認(rèn)可并經(jīng)酸證了的培養(yǎng)基，其配制方法見附錄B。

4.3.3 恒溫培養(yǎng)箱

      必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗。

4.4 測試步驟

4.4.1 測試前培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

4.4.2 將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。

4.4.3 靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30 min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為不大于4 h。

4.4.4 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.4.5 采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2 d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。

4.4.6 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)血作對照培養(yǎng)。

4.5 菌落計數(shù)

4.5.1  用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計,然后用5?10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.5.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.6 注意事項

4.6.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

4.6.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。

4.6.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4.6.4 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大,計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.6.5 采樣施應(yīng)仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

5 測試規(guī)則

5.1 測試條件

      在測試之前，要對潔凈室（區(qū)）相關(guān)參數(shù)進(jìn)行預(yù)先測試.這類測試將會提供測試沉降落的環(huán)境條件， 例如：這種預(yù)先測試或可包括：

      a）溫度和相對濕度的測試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（無特殊要求時，溫度在18℃?26℃，相時濕度在45%?65%為宜），同時應(yīng)滿足測試儀器的使用范圍；

      b）室內(nèi)送風(fēng)盤或風(fēng)速的測試，或壓差的測試；

      c）高效過濾器的泄漏測試。

5.2 測試狀態(tài)

      靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測試。

      靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。

      沉降曲測試前，被測潔凈室（區(qū)）由使用者決定坦否需要預(yù)先消毒。

      測試報告中應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。

5.3 測試時間

5.3.1 在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10 min后開始.對非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣詞節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于 30 min后開始，在靜態(tài)b測試時，對單向流潔凈室（區(qū)），測試官在生產(chǎn)操作人員撤高現(xiàn)場并經(jīng)過10 min 自凈后開始;對非單向流潔凈空（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20 min自凈后開始。

5.3.2 在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。

5.4 沉降菌菌落數(shù)計算

5.4.1 采樣點數(shù)量及其布置

5.4.1.1 最少采樣點數(shù)目

      沉降落測試的最少采樣點數(shù)目可參照GB/T 16292-2010。

5.4.1.2 采樣點的位置

      沉降菌的采樣點位置可參照GB/T 16292-2010。

      a）工作區(qū)采樣點位置禹地0.8 m?1.5 m左右（略高于工作面）；

      b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。

      采樣點布置的規(guī)則見附錄A。

5.4.2 最少培養(yǎng)皿數(shù)

      在滿足最少采樣點數(shù)目的同時,還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表1。

5.4.3 采樣次數(shù)

      每個采樣點一般采樣一次.

5.4.4采樣注意事項

5.4.4.1 對于單向流潔凈室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對氣流方向,對于非單向流潔凈室 （區(qū)），采樣口向上。

5.4.4.2 布置采樣點時，至少應(yīng)盡最避開塵粒較集中的回風(fēng)口。

5.4.4.3 采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動。

5.4.4.4 應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

5.4.4.5 培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜何時進(jìn)行對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿（TSA或SDA） 一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

5.5 記錄

      測試報告應(yīng)包含以下內(nèi)容：

      a）測試者的名稱和地址，測試日期；

      b）測試依據(jù)；

      c）被測潔凈室（區(qū)）的平面位置（必要時標(biāo)注相鄰區(qū)域的平面位置）；

      d）有關(guān)測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環(huán)境條件，采樣點數(shù)目以及布置圖，測試次數(shù), 或可能存在的測試方法的變更，測試儀器的檢定證書等；若為動態(tài)測試，則還應(yīng)記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場設(shè)備運轉(zhuǎn)數(shù)量及位置等；

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